葡聚糖Cross Link Dextran

固定金属离子

（1）金属离子的固定必须用过滤好的金属离子溶液，以防止金属盐在介质上沉淀。

（2）用2-5倍柱床体积的蒸馏水充分平衡柱子。

（3）选择合适的金属离子（Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+等），溶解在中性或弱酸性的溶液中，浓度为0.1~0.3M。如果是Fe3+必须在低pH下螯合（pH 3），以防止Fe3+产生沉淀。

（4）用2-5个柱床体积的金属离子溶液上柱，再用不少于5倍柱床体积的蒸馏水洗涤色谱柱，洗去未螯合的金属离子。（当然也可以把洗净没有螯合的填料直接和需要的金属离子溶液在摇床上震荡过夜，这样螯合效果更好，Ni-NTA Agarose尤其适合用这样的方法。）

（5）用2-5倍柱床体积的起始缓冲溶液平衡柱子，再上样。

（6）如果是螯合铁离子，要注意的是在中性条件下，Fe3+很容易被还原而生成沉淀，所以Fe3+溶液的pH最好是3-5。螯合Fe3+的色谱柱不能长时间保存在中性溶液中。建议每次用完后都要将螯合的Fe3+用50 mMEDTA溶液洗净，下次使用时再重新螯合。如果洗不干净，也可以将介质浸在50mM的EDTA中过夜后再清洗保存。

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葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。

葡聚糖凝胶是通过表氯醇交联多个葡聚糖得到的。葡聚糖凝胶 G-10、G-25这些葡聚糖凝胶是在水溶液中使用，若要用有机溶剂做为流动相。只有通过羟丙基化将葡聚糖凝胶 G转化为可在有机溶剂中溶胀的葡聚糖凝胶。这时的产品为葡聚糖凝胶 LH-20或LH-60。                     

离子交换葡聚糖凝胶是葡聚糖经环氧氯丙烷交联后形成的具有多孔三维空间网状结构和离子交换功能基团的多糖衍生物。它具有亲水性强、不会引起生物分子的变性与失活，母链对蛋白质、核酸及其他生物分子的非特异吸附能力小的特性。它能引入大量活性基团而骨架不被破坏，交换容量很大，外形呈球形，装柱后，流动相在柱内流动的阻力较小，流速理想。

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