本抗原修复液采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和 EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性

染色结果。

    通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

    本抗原修复液使用前必须用重蒸水或 Milli-Q 水稀释 40 倍，配制成抗原修复液(1X)。

操作步骤:

1. 对于石蜡切片：

a. 脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡 5 分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡 3 次。无水乙醇 5分钟，两次。90%乙醇 5 分钟，两次，70%乙醇 5 分钟，一次。蒸馏水 5 分钟，两次。

b. 抗原修复：将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100ºC 加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30分钟内，最佳的加热时间 需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到95-100ºC。加热可以使用普通的水浴锅，也可 以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片： 用免疫染色洗涤液洗涤切片 5 分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1X)中，95-100ºC加热约 20 分钟(加热时间可以控制在 10-30 分钟 内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸

索)。抗原修复液(1X)使用前需预热到 95-100ºC。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在 20-30 分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤 1-2 次，每次 3-5 分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。