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可溶性淀粉合成酶测定试剂盒 微量法

可溶性淀粉合成酶测定试剂盒 微量法

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产品名称: 可溶性淀粉合成酶测定试剂盒 微量法

英文名称: Micro Soluble Starch Synthase(SSS)Assay Kit

产品编号: BC1855

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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可溶性淀粉合成酶测定试剂盒产品内容:

提取液液体100mL×1瓶,4保存;

试剂一:30mL×1瓶,4保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4保存; 

试剂三:粉剂×1瓶,-20保存;

试剂四:粉剂×2瓶,-20保存;临用前加入5mL试剂一充分混匀备用;

试剂五:粉剂×1瓶,4保存;临用前加入10mL试剂一充分混匀备用;

试剂六:粉剂×1支,-20保存;临用前加入500μL双蒸水,充分溶解备用;

试剂七:液体250μL×2支,-20保存;

试剂八:液体12.5μL×2支;每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。

反应液的配制:临用前在试剂二中加入14mL试剂一,缓慢加热,逐渐升温使其溶解,冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

可溶性淀粉合成酶测定试剂盒产品说明:

SSSEC 2.4.1.21通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。

SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPHNADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比,340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

可溶性淀粉合成酶测定试剂盒操作步骤:

一、粗酶液制备

称取约0.1g组织加入1mL提取液,冰浴中匀浆。10000g 4离心10分钟,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL

测定管

样本

100

反应液

135

混匀,30保温20 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却

试剂八

75

混匀,30保温30 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 常温离心10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混合液)。37℃预热试剂五和上清液。

上清液

150

试剂五

100

试剂六

5

试剂七

5

混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A12min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1

注意:反应液如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

三、SSS活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSSU/mg prot=[ΔA÷ε×d×V]÷(Cpr×V÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS活性(U/g 鲜重)=[ΔA÷ε×d×V×109]÷(W÷V提取×VTUNEology 波长可调检测卡盒-->